使用UPLC与ICP-MS/MS及ESI-MS/MS在线联用，可同时获得多维度的重要表征数据。如图1所示，将待测样品各组分经UPLC分离后，ICP-MS/MS和ESI-MS/MS两个质谱作为检测器通过远程电缆连接，允许同时开始运行检测。通过液相的保留时间及与标准物质的对比，可对已知的化合物形态进行定性，通过ICP-MS/MS、ESI-MS/MS同时获得元素定性定量、化合物母离子、子离子碎片等关键信息。

使用UPLC与ICP-MS/MS及ESI-MS/MS在线联用，可同时获得多维度的重要表征数据。如图1所示，将待测样品各组分经UPLC分离后，ICP-MS/MS和ESI-MS/MS两个质谱作为检测器通过远程电缆连接，允许同时开始运行检测。通过液相的保留时间及与标准物质的对比，可对已知的化合物形态进行定性，通过ICP-MS/MS、ESI-MS/MS同时获得元素定性定量、化合物母离子、子离子碎片等关键信息。

图2 液相-ICP & ESI 质谱二联机数据、原理示意图

此方法具有对潜在未知化合物进行表征的能力。如图2所示，使用已知形态标准物质的保留时间进行定性的前提下，在一个新的保留时间下出现的未知形态组分同时在ICP-MS/MS与ESI-MS/MS的色谱图中出峰时，可根据ICP-MS/MS得到元素定性定量信息，而针对ESI-MS/MS提供的化合物结构碎片离子信息可通过筛选主要碎片离子峰，得到质荷比与相对丰度的信息，随后通过判断分子离子峰的碎片脱落行为、筛选亚稳离子、以重要离子质荷比的奇偶性为依据，判断此化合的裂解类型与过程，推断其官能团与骨架结构等信息，随后按多种对已知结构碎片及剩余结构碎片进行重组，得到可能的多类结构式，根据质谱或其它技术手段排除不可能存在的结构式，最终得到潜在可能的结构式①。

上述离子碎片数据的解析步骤过程，均有成熟理论分析作为依据：有机分子在得到子离子的过程中，存在1）简单开裂（α-裂解、i-裂解、σ-裂解）；2）重排裂解：已有的麦氏重排和逆Diels-Alder开裂，以及低能碰撞诱导离解中键裂解过程中氢重排的9条规则②。

• UPLC条件优化

本实验均采用谱育科技EXPEC 520型UPLC模块进行，详细色谱工作条件见表1.

表1 液相色谱工作条件

• ICP-MS/MS条件优化

在ICP-MS/MS中采用质量转移模式可有效消除Se所遭受的质谱干扰，显著降低检出限：通入反应气O2，将Se+离子转化为相应的SeO+产物离子的方法可以显著消除质谱干扰，其原理如下图所示。

图3 O2反应模式下MS/MS质谱质量转移和干扰消除示意图

• ESI-MS/MS条件优化

利用碰撞诱导解离产生的准分子离子信息及碎片离子信息，选择2~3个强度较大的特征产物离子建立MRM定量方法，即可实现对硒形态的分析测定。表2给出了这几种待测化合物的主要碎片结构信息。

表2 硒代氨基酸化合物的主要碎片结构信息

图4 UPLC-ICP & ESI-MS/MS二联质谱联用仪测定4种Se形态的谱图

利用UPLC-ICP-MS/MS和UPLC-ESI-MS/MS相结合的测试方式，结果如图4所示，上部分谱图为UPLC-ICP-MS/MS端出峰情况，下部分谱图为UPLC-ESI-MS/MS端出峰情况，4种硒形态的分离顺序完全一致，硒形态完全分离且分离度均大于1.5，相对保留时间最小误差约：0~0.3 min。